作为焦点的“致泻大肠埃希氏菌”，究竟该如何检测？- 工业快报

GB29921-2021《食品安全国家标准预包装食品中致病菌限量》于2021年9月7日发布，2021年11月22日实施。

“致泻大肠埃希氏菌”突然就成了焦点！

在2013版本中，原检测项目为大肠埃希氏菌O157:H7/NM。然而随着对致泻大肠埃希氏菌检验、鉴定能力的提升，越来越多的由其引起的暴发和病例被识别出来，其导致的疾病负担以往也可能被低估。我国食源性疾病监测结果显示，近几年细菌性食源性疾病暴发事件中，致泻大肠埃希氏菌引起的事件数已经上升到第五位，高危食品主要为肉制品、蔬菜、水果等。

2021版标准修订将“大肠埃希氏菌O157:H7”修改为“致泻大肠埃希氏菌”，并对肉制品中的牛肉制品、即食生肉制品、发酵肉制品类，即食果蔬制品中的去皮或预切的水果、去皮或预切的蔬菜及上述类别混合食品规定了限量要求n=5，c=0，m=0/25g。

（来源：食品安全国家标准数据检索平台）

致泻大肠埃希氏菌是什么？

致泻大肠埃希氏菌是一类能引起人体以腹泻为主的大肠埃希氏菌，可经过污染食物引起人类发病。常见的致泻大肠埃希氏菌主要包括：

肠道致病性大肠埃希氏菌EPEC

肠道侵袭性大肠埃希氏菌EIEC

产肠毒素大肠埃希氏菌ETEC

产志贺毒素大肠埃希氏菌STEC（包括肠道出血性大肠埃希氏菌EHEC）

肠道集聚性大肠埃希氏菌EAEC

致泻大肠埃希氏菌如何检测？

GB4789.6-2016致泻大肠埃希氏菌检验流程：

目前国标PCR确认试验方法为普通PCR法。

接下来带大家了解一下

美正的两种PCR检测方案

1. 普通PCR检测流程及产品介绍

2. 荧光定量PCR检测流程及产品介绍

致泻大肠埃希氏菌检测注意事项及常见问题

操作注意事项

（1）PCR鉴定前需将菌纯化于非选择性的固体培养基上；

（2）所有PCR操作需严格分区，不同区域内仪器物品不可混用；

（3）所有冷冻试剂使用前需融化混匀短暂离心后开盖使用；

（4）试剂避免反复冻融，大体积试剂可配置后小体积分装冷冻；

（5）操作需要带手套，不可使用带荧光物质或者是带粉末的手套；

（6）提核酸加热后需冷却到室温后在开盖操作，避免气溶胶污染；

（7）PCR管及管盖上不可使用记号笔标记；

（8）不同批次试剂盒试剂不可混用；

（9）严格按照试剂盒说明书设定反应参数和荧光通道。

用荧光定量PCR符合标准要求吗？

答：这个不好说，一般按照不同的评审员的理解来要求。多数评审员应该会算是一种方法偏离吧。但是荧光定量PCR在技术上肯定是更先进的，至少明显降低了污染风险和生物安全风险，是今后食品微生物学检验技术的发展方向。GB 4789.6－2016的6.5.8条款：如用商品化PCR试剂盒或多重聚合酶链反应（MPCR）试剂盒，应按照试剂盒说明书进行操作和结果判定。这时候，我使用商品化荧光定量PCR试剂盒，是不是就可以按照试剂盒说明书进行了？大家可以探讨一下。

现在的食品实验室是否可以通过改装成分子实验室？食品检测的BSL-II室可以和PCR实验室共用吗？

答：食品实验室本来就可以包括分子实验部分。所以，常规食品微生物检测的生物安全二级实验室可以和PCR实验室共用。但是，因为生物安全二级实验室必须是负压或者常压，而PCR实验室是相对正压，还有人流物流的多次进进出出，在防止交叉污染方面比较辛苦。最好还是不要合并使用。

美正可提供“致泻大肠埃希氏菌”从前处理及增菌培养到PCR确认试验整体解决方案，并提供全程技术支持培训服务。

产品名称	产品货号	产品规格	备注/用途
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DZ10015-3	48T
致泻大肠埃希氏菌（DEC）核酸检测试剂盒（PCR-探针法）	LR707F2	24T	荧光定量PCR，含等效基因eae/ipaH
LR707F3	48T
Qgen480实时荧光定量PCR仪	Qen480	1台／箱	用于PCR反应扩增、检测及判读
金属浴	ose-db-01	1台／箱	用于核酸提取过程加热
48孔加热模块	LR480	1块	用于配套预分装裂解液使用，如果购买美正金属浴，可赠送一块
迷你离心机	HM	1台／箱	用于PCR操作过程短暂离心