常用的冷冻保存法包括:
1、低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):
低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。
2、干冰保存法(-70℃左右):
即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存;
3、液氮保存法(-196℃):
是适用范围*广的微生物保存法。
其操作步骤如下:
a、装安瓶管:使用尽量浓厚的菌体悬浮于含有适当防冻剂(保存霉菌不用防冻剂)的灭菌溶液中,将0.2~1mL的这种溶液分装于安瓶中,或在装有分散剂的安瓶中直接接种,或将菌丝体琼脂块直接悬浮于分散剂中。
b、熔封安瓶管:若直接贮存于气相液氮中(-150℃~-170℃)时,则不需熔封。
c、检查安瓶管是否熔封良好:即在4℃下,将熔封安瓶管在适当的色素溶液中浸泡2~30分钟后,观察有无色素进入安瓶。
d、缓慢冷却:将熔封安瓶管置于小罐中,然后用液氮气以约1℃/min的速度冷却至-25℃左右,也可在-20℃~-25℃的冰箱内缓慢冷却30~60min。
e、速冷:*浸入液氮中快速冷却至-196℃。
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