新品上市|高效样品前处理之法宝-复合型免疫亲和柱

据世界粮农组织的调查，世界上每年有25%粮食受到已确认的霉菌毒素的污染。霉菌毒素是霉菌在食品或饲料里生长所生产的代谢产物，对人类和动物都有害。霉菌也称丝状真菌，是菌丝体比较发达但没有较大子实体的小型真菌的统称，是微生物中的高级生物，其形态和构造比细菌复杂。

Welchrom^®复合型免疫亲和柱用于从样品中分离、纯化真菌毒素，原理是基于抗原与抗体之间的特异性反应。免疫亲和柱中的抗体通过共价键作用悬浮在凝胶中，特异性吸附样品中的真菌毒素。如果供检测的样品中含有真菌毒素，样品通过免疫亲和柱时，毒素被抗体捕捉结合。所有其他物质，被从免疫亲和柱中清洗出去。甲醇作为洗脱液，将真菌毒素从抗体上洗脱。

• 可同时测定多种真菌毒素含量，减少工作量。

• 采用高特异性和高亲和力的的单克隆抗体。

• 柱容量高，有效提高纯化效率。

• 达到真菌毒素检测的国内外限量标准。

• 良好的稳定性和可靠性，回收率高。

• 纯化后直接用于ELISA法，高效液相色谱法，荧光光度法等。

• 稳定性：12个月。

• 可以用于复杂样品检测，包括食品、饲料、调味品等多种复杂基质。

• 参考国家标准，检测结果准确可靠，满足客户的不同需求。

样本处理步骤及亲和柱操作步骤

（AOZ三合一免疫亲和柱为例）

（一）花生、玉米、大米、小麦及其制品、中药和饲料

┅┅ 称取5g粉碎的样品，加入1g氯化钠，再加入甲醇-水（8：2）溶液20mL。

┅┅ 涡旋或振荡提取20min。

┅┅ 4000r/min离心5min或用定量滤纸过滤。

┅┅ 取10mL滤液并加入40mLPBS混匀（中药材根据品种，可能需加入PBS-吐温20溶液），用玻璃微纤维滤纸过滤。

┅┅ 取10ml过滤后液体过免疫亲和柱净化。

稀释倍数：2

（三）酱油和醋等液体样品

┅┅ 称取25g样品，以甲醇-水（8：2）溶液定容至50mL。

┅┅ 以均质器高速搅拌（10000r/min及以上，均质器速度较慢时，应适当延长提取时间），提取2min；也可采用摇床（200r/min以上）振荡20min、超声提取20min和涡旋提取15min的方式进行提取。

┅┅ 4000r/min离心5min或用定量滤纸过滤。

┅┅ 取10mL滤液并加入40mLPBS缓冲液稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤。

┅┅ 取10ml过滤后液体过免疫亲和柱净化。

稀释倍数：1

┅┅ 将免疫亲和柱连接于10mL注射器下。按照样本处理步骤的上样量进行过柱。

┅┅ 将空气压力泵与注射器连接，打开亲和柱下帽，调节压力使溶液以约1-2滴/秒的流速缓慢通过免疫亲和柱，直至液体排干。

┅┅ 以10.0mL的PBS缓冲液淋洗柱子2次，弃去全部流出液，并通过5-10ml空气，吹干亲和柱。

┅┅ 准确加入1.0mL洗脱液（甲醇-乙酸（98：2）溶液）洗脱，流速为1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。

经免疫亲和柱净化后，收集到的洗脱液可直接使用荧光计或者HPLC检测，也可使用薄层色谱或者酶联免疫试剂盒进行检测。洗脱液中各种毒素的检测结果乘以相应的稀释倍数，即为样品中对应毒素的浓度。

经过AOZ三合一免疫亲和柱处理过的样品，在各自液相条件下的图谱：

用于检测谷物、酒类、中药等食品和饲料等样本中的真菌毒素。

柱容量：AFB≥200ng，OTA≥100ng，DON≥1000ng，ZEN≥1000ng。

回收率：≥80%。

贮藏条件：可于2-8℃储存，不可冻存。

保存期：该产品有效期为12个月。

┅┅ 真菌毒素危害极大，应戴手套操作。

┅┅ 不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。

┅┅ 洗脱液可以直接使用色谱级甲醇洗脱，但可能会降低赭曲霉毒素A回收率。

┅┅ 多毒素检测中，呕吐毒素因为是水溶性，过柱操作时免疫亲和柱对有机溶剂耐受性低，所以组合中包含有呕吐毒素的免疫亲和柱前处理方法会相应复杂一些。黄曲霉毒素、玉米赤酶烯酮、赭曲霉毒素A的组合，前处理方法基本一致。

OZ二合一免疫亲和柱：GB 5009.96-2016和中国药典的相应方法。

DZ二合一免疫亲和柱：GB5009.111-2016、GB 5009.209-2016的相应方法。

AZ二合一免疫亲和柱：GB 5009.22-2016、GB 5009.24-2016、GB 5009.202-2016和中国药典的相应方法。

AO二合一免疫亲和柱：GB 5009.22-2016、GB 5009.24-2016、GB 5009.96-2016和中国药典的相应方法。

AOZ三合一免疫亲和柱：GB 5009.22-2016、GB 5009.24-2016、GB 5009.202-2016、GB 5009.96-2016和中国药典的相应方法。

AODZ四合一免疫亲和柱：GB5009.22-2016、GB5009.111-2016、GB 5009.209-2016、GB 5009.96-2016的相应方法。