了解电化学发光免疫测定原理

导读:了解电化学发光免疫测定原理


电化学发光免疫测定(Electrochemiluminescence immunoassay,ECLI)。ECLI 是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术。电化学发光法源于电化学法和化学发光法,而ECLI 是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物,是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应,包括了电化学和化学发光二个过程。ECL 不仅可以应用于有的免疫测定,而且还可用于DNA/RNA探针检测。

电化学发光反应原理

电化学反应过程:在工作电极上(阳极)加一定的电压能量作用下,二价的三氯联吡啶钌 [Ru(bpy)3]2+ 释放电子发生氧化反应而成为三价的三氯联吡啶钌 [Ru(bpy) 3 ] 3+ ,同时,电极表面的TPA也释放电子发生氧化反应而成为阳离子自由基 TPA+ ,并迅速自发脱去一个质子而形成三丙胺自由基 TPA·,这样,在反应体系中就存在具有强氧化性的三价的三氯联吡啶钌 [Ru(bpy) 3 ] 3+ 和具有强还原性的三丙胺自由基 TPA·。

1、化学发光过程:具有强氧化性的三价的三氯联吡啶钌 [Ru(bpy) 3 ] 3+ 和具有强还原性的三丙胺自由基 TPA· 发生氧化还原反应,结果使三价的三氯联吡啶钌 [Ru(bpy)3]3+ 还原成激发态的二价的三氯联吡啶钌 [Ru(bpy) 3 ] 2+ ,其能量来源于三价的三氯联吡啶钌 [Ru(bpy) 3 ] 3+ 与三丙胺自由基 TPA· 之间的电势差,激发态 [Ru(bpy) 3 ] 2+ 以荧光机制衰变并以释放出一个波长为 62Onm 光子的方式释放能量,而成为基态的 [Ru(bpy) 3 ] 2+ 。


2、循环过程:上述化学发光过程后,反应体系中仍存在二价的三氯联吡啶钌 [Ru(bpy) 3 ] 2+ 和三丙胺(TPA),使得电极表面的电化学反应和化学发光过程可以继续进行,这样,整个反应过程可以循环进行。

通过上述的循环过程,测定信号不断的放大,从而使检测灵敏度大大提高,以 ECL 测定具有高灵敏的特点。


电化学发光免疫原理

上述的电化学发光过程产生的光信号的强度与二价的三氯联吡啶钌 [Ru(bpy) 3 ] 2+ 的浓度成线性关系。

将二价的三氯联吡啶钌 [Ru(bpy) 3 ] 2+  与免疫反应体系中的一种物质结合,经免疫反应、分离后,检测免疫反应体系中剩余二价的三氯联吡啶钌 [Ru(bpy) 3 ] 2+ 经上述过程后发出的光,即可得知待检物的浓度。



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