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实验室的小师妹，天天一脸崇拜的的跟着师兄学实验，“师兄，实时定量PCR曲线好完美啊”“师兄，Western Blot条带好漂亮啊，都没有杂带”……，这样下去，我师姐的威信如何立得住，师姐在实验室这么多年，也不是白学的，必须在小朋友面前秀秀我高大上的组织免疫荧光的片子，怎么也得让他们崇拜一下，接下来就和大家分享下免疫荧光相关的经验！
什么是免疫荧光
免疫荧光是在免疫学，生物化学和显微技术的基础上建立的一项技术，再用荧光抗体（或者）抗原作为探针检测细胞或组织内相应的抗原（或抗体）。利用荧光显微镜可以看见荧光在细胞或者组织的表达，从而确认抗原或抗体的性质和定位。常用的方法有直接法和间接法。
间接法实验步骤说明
冰冻切片为例：
1.切片固定：冰冻切片从冰箱拿出来复温，晾干水分，冷丙酮固定10min，待丙酮完全干后于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
2.抗原修复：组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液（PH8.0）的修复盒中，于微波炉内中低火5min进行抗原修复。自然冷却后将玻片置于PBS（PH7.4）中在摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
3.封闭：切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈（防止抗体流走），在圈内滴加3%BSA均匀覆盖组织，室温封闭30min。
4.加一抗：甩掉封闭液，在切片上滴加配好的一抗，平放于湿盒内4°C孵育过夜（湿盒内加少量水防止抗体蒸发）。
5.加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的荧光二抗覆盖组织，避光室温孵育50min。
6.DAPI复染细胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。
7.封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。
8.镜检拍照：切片于Echo Revolve Gen2正倒置荧光显微镜下观察并采集图像。
显微镜在最后结果的呈现中发挥重要作用，我用的Echo Revolve Gen2正倒置荧光显微镜那是其他小伙伴羡慕的对象。
第一：高颜值，2021缪斯（MUSE）国际设计奖铂金奖 。
第二：独有的实时DHR数字处理技术，通过数字化图像处理，在镜下实时显示高分辨图像，清晰展现样本细微结构，颠覆传统成像效果。
第三：Z轴高精度自动层扫，配合实时DHR数字降噪技术，在保持高分辨率的同时，对较厚样本进行全景深扫描合成，实现全景深观察。
下面秀一秀师姐的荧光图
部分图源：网络，侵删
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