细胞培养方法步骤- 工业快报

细胞培养方法步骤

产业资讯 / 来源：工业快报 / 作者：工业快报 / 发布时间：2021-11-15

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导读:细胞培养方法步骤

培养方法如下：
1、将细胞稀释到1000个细胞/mL，接种到24孔板，每孔1ml。
2、接种后第二天在100ug/mL~1mg/mL的G418浓度范围内进行筛选。
3、每隔3天跟换1次培养液，保持G418浓度不变。
4、选择出在10~14天内使全部死亡的G418浓度来进行下一步的筛选试验。由于每种细胞对G418的敏感性不同，一般变动在100ug/ml～1000ug/ml范围。
培养步骤：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将有细胞悬液加入培养瓶中培养*（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养*。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1）、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

（1）、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

（2）、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

（3）、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
（4）、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
2、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法三：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。
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