逆转录反应体系分析

导读:逆转录反应体系分析

逆转录反应体系:
1. RNA模板
通常20μL的逆转录体系,加入RNA 1μg,如果RNA加入过多,会导致逆转录不充分。

2. 引物
常用的有随机引物和Oligo(dT)引物:
随机引物会将有RNA分子均进行逆转录,此时得到的cDNA大部分来源于rRNA,主要在部分mRNA含有逆转录酶终止序列而难以得到其全序列时使用;
Oligo(dT)与真核生物mRNAPoly(A)区域匹配,可以特异性的对mRNA进行逆转录。

3. 逆转录酶
逆转录过程涉及以RNA为模板合成DNA和以DNA为模板合成互补链的两个过程,目前市场上的逆转录酶都同时具有这些功能,因此只需在反应体系中加入逆转录酶即可,而不需额外加入DNA聚合酶。

4.4种dNTPs

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